pcr电泳齿梳体积

分类:求体积浏览量:3012发布于:2021-05-06 04:32:29

固定的反应试剂:比如buffer,dNTP,酶的用量一般都是固定的,按照protocol给出的要求加.关键是模板和引物的量.模板不能加太多,一般是50ul体系10-100ng左右,体积根据你DNA模板的浓度确定,比如你的DNA浓度是100ng/ul,你加1微升就够了.如果浓度太高,适当稀释一下.引物的浓度一般是终浓度0.2uM.把引物稀释成10uM的,加1微升到50ul体系里头.最后用水补齐到50ul.加的时候最好先加水,再加buffer,然后模板,引物,最后加酶.冰上操作.

10mM 除20就是你PCR反应体系中的dNTP浓度了

看产物浓度,一般循环28-35个周期的产物送去测序的时候给个10-15微升就够了.引物一般可以用通用引物就不用送,自己的引物需要送,一般也是10微升足够了.

这是biorad的么光看梳子不行啊,你准备倒多厚的agarose?那我就以这些配套的方胶槽来说吧,假设我倒1/4的胶(即最小的正方形胶槽,梳子用一半,13齿的是6个孔,18齿的是8个孔,对吧),agarose体系为20mL,浓度不管.25齿大概在5ul左右.18齿大概在20ul左右.13齿大概在35ul左右.最大的那个,marker道就随意了,孔里应该能装下100ul左右.不过说实话我没用过这个梳子其实如果你上样量大,胶就倒厚点,否则就薄点就行了.我酶切的时候,用13孔梳子,小格,可以倒将近30mL胶(会漫出一些),然后可以跑50uL多

1、按 PCR 仪正面左下角电源开关,启动 PCR 仪.2、放 PCR 离心管,先把顶盖向上扳,再往前推,露出放样孔,PCR 管 放入前应加好反应体系各组分,再放入 PCR

目的基因可能有,但是不会很多.可以加水,但是好像没有必要啊.pcr过程中水量大部分蒸发后反应体系中的各成分的浓度有所改变,最严重的就是ph值的变化,可能会导致酶的活性降低或者失活,所以有可能你目的基因扩增的量很少,或者根本没有.我不明白你加水做什么用的?测序其实是要求目的基因在某一浓度之上时总量必须够,对溶解的水没有多少要求.举个简单例子,如果测序需要1ug的量,如果你样品的浓度在100ng的话,15ul的量就够他们测序了.相反,如果你样品的浓度特别低,即使你送她一吨,他也无法测序,因为浓度不够.所以跟加水与否关系不大.其实你可以测序,现在测序公司测不出结果不收费的.

Marker可以粗略估计目的片段的大小~要想知道准确的大小那就送测序吧~

一般是0.2ml的.稍微大点或小点可能也可以.

答:pcr产物电泳检测的结果只是一个粗略的定性结果.对于与目的片段条带大小只相差几个碱基的非特异性pcr扩增产物是无法用***区分开的.但是dna测序反应敏感而客观,可以直接反应出模板本身的情况.需要强调的是,高质量的pcr产物才可能得到高质量的测序结果,如果您对pcr产物的纯度不很确定,希望您可以将pcr产物进行克隆处理,以确保得到好的测序结果.以下图为例:该反应的背景信号较高,不利于碱基的判读.解决办法:改变pcr条件,重新扩增.或者可以将该pcr产物克隆到质粒中,初步筛选后进行单克隆测序.

你这第一块是dna 第二块是质粒?怎么都有两条带?而且看你pcr结果基本没有扩出来啊,也不知道你要问什么问题